Была эта проблема с виртуальным приложением.Все разрешения были установлены.IIS_IUSRS, AppPoolIdentity, а затем дал полный доступ для всех.Ничего не получалось.Перезапустил apppool, сайт и IIS, но не пошел.
Удалил виртуальное приложение, добавил его с нуля, и он начал работать.
Жаль, что я не знал, что его решило.