Я предполагаю, что файл достаточно мал, чтобы хранить две его копии в памяти:
filepath = 'hole.txt'
with open(filepath, 'r') as f:
original_lines = f.readlines()
new_lines = [line.strip() + "#\n" for line in original_lines]
with open(filepath, 'w') as f:
f.writelines(new_lines)
Сначала мы открываем файл и читаем все строки в список. Затем новый список генерируется путем strip()
добавления разделителей строки из каждой строки, добавления дополнительного текста и нового разделителя строки после него.
Затем последняя строка перезаписывает файл новыми измененными строками.