Вот еще один вариант
var users = Usernames.Split(new char[] {' ',','}, StringSplitOptions.RemoveEmptyEntries);
A. Это быстрее, чем разделение с использованием new string[]{...}
.
B. Это также устойчиво к отсутствующим ' '
с, например string Usernames = "User1,User2, User3,User4";