Вам необходимо добавить разрешение для пользователя, связанного с Пулом приложений, в папке, в которой находится ваш веб-сайт.
Имя пользователя обычно IUSR, NETWORK SERVICE или IIS_IUSRS.
Разрешение на доступ к корню: чтение и выполнение, список папок и чтение
Разрешение на рут / App_Data: All
Или другим подходом может быть установка имени пользователя в пуле приложений (Advance setting -> Identity) на имя пользователя, имеющего права на чтение каталога. Возможно, вам потребуется создать новый пул приложений.