Используете ли вы Server.TransferFile для обслуживания файла с сервера? Или у вас может быть что-то настроенное в ваших обработчиках, которое вызывает аналогичный метод для отправки файлов ... Единственное, что я видел, чтобы разблокировать файл, это сбросить IIS: - /
Вместо того, чтобы IIS обслуживал файл, если вы позволили asp.net отправить его обратно в поток ответов, у вас не должно возникнуть проблем с заблокированным файлом
также убедитесь, что вы утилизируете все считыватели STream, которые обращаются к файлам.
Если это не поможет, пожалуйста, напишите код: -)