Ваш пул установлен как .NET 4 framework, но ваше приложение настроено на использование .NET 4?
Убедитесь, что на вкладке ASP.NET установлена корректирующая версия в свойствах вашего виртуального каталога:

Также убедитесь, что ваш пользователь ASP.NET имеет правильный доступ:
- Щелкните правой кнопкой мыши папку веб-сайта в IIS
- ВыберитеПолномочия
- Выбор сетевой службы
- Разрешение доступа на чтение для пользователя, от имени которого запускается процесс ASP.NET.
Возможно, вы используете пользовательского пользователя или ещеСкорее всего, разрешения будут правильными из коробки.