Ваше описание проблемы неполное или не соответствует ошибке. Вам нужно будет предоставить немного больше информации для лучшего ответа, но вот мой предварительный ответ.
Ошибка указывает, что ваше приложение использует встроенную аутентификацию в SQL. Таким образом, это поможет увидеть строку подключения. Скорее всего, где-то написано «SSPI». Это означает, что пользователь, для которого выполняется контейнер приложения (NETWORK SERVICE), пытается подключиться к базе данных, но не может, потому что у него нет разрешения на это.
Таким образом, вы либо изменили строку подключения как часть того, что сделали, либо NETWORK SERVICE ранее был пользователем базы данных (я думаю, это не очень хорошая идея).
В вашем web.config возможны другие настройки безопасности. Ваше приложение, похоже, использует проверку подлинности форм. Если IIS настроен для разрешения анонимного доступа, а ваш web.config настроен на олицетворение, то это также может привести к попытке NETWORK SERVICE подключиться к SQL.
Как приложение должно подключаться? Есть ли у вас служебная учетная запись (учетная запись одного пользователя), которую должны проходить все пользователи, которые проходят проверку подлинности с помощью проверки подлинности с помощью форм, для операций с базой данных? Если это так, то вам нужно изменить строку подключения к базе данных, чтобы она содержала имя пользователя и пароль.
Чтобы это исправить, необходимо проверить строку подключения, все параметры, связанные с авторизацией форм в файле web.config, и параметры безопасности в IIS. Я думаю, это не связано с тем, что вы добавили пользователя.
Edit:
Таким образом, вы используете встроенную безопасность, как я и подозревал. Это не будет работать с Forms Auth, потому что, пока пользователь аутентифицируется в вашем приложении с помощью своего идентификатора пользователя, ваше приложение аутентифицируется в базе данных с интегрированной аутентификацией, то есть NETWORK SERVICE. Вам нужна учетная запись службы базы данных, imo, и я не знаю, как это могло работать раньше, если вы не изменили строку подключения.