Да, регистр ключей имеет значение.
проверьте пример,
определите переменные в en.yml
en:
hello: "hello world"
Hello: "HELLO WORLD"
и получите доступ к нему из консоли как
2.2.1 :001 > I18n.t('hello')
=> "hello world"
2.2.1 :002 > I18n.t('Hello')
=> "HELLO WORLD"
Пожалуйста, проверьте Rails Internationalization