Конечно, в общей схеме это не имеет значения, а читаемость важнее. Но что это? Как мы узнаем? Мы проверяем это. Чтобы быть справедливым, мы протестируем равное количество значений True и False с == True и! = False в Python:
>>> from timeit import Timer
>>> import time
>>> f=Timer('x=True;x!=False;x=False;x!=False',timer=time.clock)
>>> t=Timer('x=True;x==True;x=False;x==True',timer=time.clock)
>>> f.timeit(number=10000000)
3.2700000000000005
>>> t.timeit(number=10000000)
3.629999999999999
Теперь это довольно последовательно в течение нескольких прогонов. Вот это да. Тестирование на! = False быстрее, чем тестирование == True. Если вам придется сделать это 10000000 раз, вы выиграете полсекунды. Наслаждайся этим временем.